Контаминацијата на клеточните култури лесно може да стане најчест проблем во лабораториите за клеточна култура, понекогаш предизвикувајќи многу сериозни последици.Загадувачите од клеточната култура може да се поделат во две категории, хемиски загадувачи како медиум, серумски и водени нечистотии, ендотоксини, пластификатори и детергенти и биолошки загадувачи како бактерии, мувла, квасци, вируси, вкрстени инфекции со микоплазми.Контаминирани од други клеточни линии.Иако е невозможно целосно да се елиминира контаминацијата, нејзината фреквенција и сериозност може да се намалат со темелно разбирање на нејзиниот извор и следење добри асептички техники
1. Овој дел ги прикажува главните видови на биолошка контаминација:
Бактериска контаминација
Контаминација со мувла и вируси
Контаминација со микоплазма
Контаминација со квасец
1.1 Бактериска контаминација
Бактериите се голема група на сеприсутни едноклеточни микроорганизми.Тие обично се само неколку микрони во дијаметар и можат да бидат во различни форми, од топчиња до прачки и спирали.Поради нивната сеприсутност, големина и брза стапка на раст, бактериите, заедно со квасецот и мувлата, се најчестите биолошки загадувачи во клеточната култура.
1.1.1 Откривање на бактериска контаминација
Бактериската контаминација лесно се открива со визуелна инспекција на културата во рок од неколку дена откако ќе се зарази;
Инфицираните култури обично изгледаат облачно (т.е. матно), понекогаш со тенок филм на површината.
Исто така често се среќаваат ненадејни падови на pH вредноста на медиумот за култура.
Под микроскоп со мала моќност, бактериите се појавуваат како ситни, подвижни гранули меѓу клетките, а набљудувањето под микроскоп со висока моќност може да ги разреши формите на поединечни бактерии.
1.2 Контаминација со мувла и вируси
1.2.1 Контаминација со мувла
Мувлите се еукариотски микроорганизми од габичното царство кои растат во форма на повеќеклеточни филаменти наречени хифи.Сврзните мрежи на овие повеќеклеточни филаменти содржат генетски идентични јадра наречени колонии или мицелиум.
Слично на контаминацијата со квасец, pH вредноста на културата останува стабилна во текот на почетната фаза на контаминација, а потоа брзо се зголемува бидејќи културата станува посериозно инфицирана и станува заматена.Под микроскоп, мицелиумот е обично филаментозен, понекогаш како густи кластери на спори.Спорите на многу мувла може да преживеат во екстремно сурови и гостопримливи средини за време на нивната фаза на мирување и се активираат само кога ќе се сретнат соодветни услови за раст.
1.2.2 Контаминација со вируси
Вирусите се микроскопски инфективни агенси кои ја преземаат машината за репродукција на клетката домаќин.Нивната екстремно мала големина ги отежнува откривањето во културата и отстранувањето од реагенсите што се користат во лабораториите за клеточна култура.Бидејќи повеќето вируси имаат многу строги барања за нивните домаќини, тие обично не влијаат негативно на клеточните култури на други видови освен домаќинот.
Сепак, употребата на клеточни култури инфицирани со вирус може да претставува сериозен ризик за здравјето на лабораторискиот персонал, особено ако клетките на луѓето или приматите се одгледуваат во лабораторија.
Вирусна инфекција во клеточните култури може да се открие со електронска микроскопија, имунобоење со сет на антитела, ELISA или PCR со соодветни вирусни прајмери.
1.3 Контаминација со микоплазма
Микоплазмите се едноставни бактерии без клеточни ѕидови и се смета дека тие се најмалите организми кои се самореплицираат.Поради нивната екстремно мала големина (обично помала од 1 микрон), микоплазмата е тешко да се открие додека не достигнат екстремно висока густина и не предизвикаат влошување на клеточните култури;Дотогаш, обично нема очигледни знаци на инфекција.
1.3.1 Откривање на контаминација со микоплазма
Некои бавно растечки микоплазми може да опстојуваат во културите без да предизвикаат клеточна смрт, но тие го менуваат однесувањето и метаболизмот на клетките домаќини во културите.
Хроничната инфекција со микоплазма може да се карактеризира со намалена стапка на клеточна пролиферација, намалена густина на сатурација и аглутинација во културата на суспензија.
Сепак, единствениот сигурен начин за откривање на контаминација со микоплазма е редовно тестирање на културата со користење на флуоресцентно боење (на пример, Hoechst 33258), ELISA, PCR, имунобоење, авторрадиографија или микробиолошки тестови.
1.4 Контаминација со квасец
Квасците се едноклеточни еукариоти од габичното царство, со големина од неколку микрони (обично) до 40 микрони (ретко).
1.4.1 Откривање на контаминација од квасец
Како и кај бактериската контаминација, културите контаминирани со квасец може да станат заматени, особено ако контаминацијата е во напредна фаза.PH на културите контаминирани со квасец се менува многу малку додека контаминацијата не стане потешка, во која фаза pH обично се зголемува.Под микроскоп, квасецот се појавува како индивидуални јајцевидни или топчести честички и може да произведе помали честички.
2. Вкрстена инфекција
Иако не е толку вообичаена како микробната контаминација, екстензивната вкрстена контаминација на многу клеточни линии со HeLa и други брзорастечки клеточни линии е јасно дефиниран проблем со сериозни последици.Добијте клеточни линии од реномирани клеточни банки, редовно проверувајте ги карактеристиките на клеточните линии и користете добри асептични техники.Овие практики ќе ви помогнат да избегнете вкрстена контаминација.Отпечатокот на ДНК, кариотипизацијата и изотипот може да потврдат дали има вкрстена контаминација во вашата клеточна култура.
Иако не е толку вообичаена како микробната контаминација, екстензивната вкрстена контаминација на многу клеточни линии со HeLa и други брзорастечки клеточни линии е јасно дефиниран проблем со сериозни последици.Добијте клеточни линии од реномирани клеточни банки, редовно проверувајте ги карактеристиките на клеточните линии и користете добри асептични техники.Овие практики ќе ви помогнат да избегнете вкрстена контаминација.Отпечатокот на ДНК, кариотипизацијата и изотипот може да потврдат дали има вкрстена контаминација во вашата клеточна култура.
Време на објавување: 01.02.2023